蝙蝠適應了夜間飛行和生活的能力，生理功能發生了壹系列重要變化。通常蝙蝠視力很差，但聽覺極其發達。在夜晚或非常昏暗的環境中，它們可以自由飛翔，準確捕捉食物。最基本的手段是使用回聲定位。實驗表明，大多數蝙蝠利用喉嚨發出的超聲波脈沖來確定自己的位置。
但這不壹樣。壹些大型果蝠，如棕果蝠，具有特殊的回聲定位能力，它們利用舔舌頭的聲音作為聲音定位的依據。回聲定位功能對蝙蝠的生活非常重要，這使它能夠在夜間或昏暗的環境中占據鳥類食蟲動物無法使用的生態位，但這些地方是各種鳥類白天生活的主導城市。
大多數蝙蝠的叫聲頻率在20到60千赫之間。頻率小於20 kHz的聲波波長大於大多數昆蟲聲波的波長，所以會穿過昆蟲而不被反射回來；當頻率高於60 kHz時，在空氣中衰減很快，限制了它的可用範圍，所以大多數蝙蝠的叫聲頻率不會高於60 kHz。然而，壹些飛行速度較慢的蝙蝠卻能對高頻聲波做出輕松反應，這是它們理想的應用“武器”。
短耳三葉鼻蝠能發出非常高頻率的叫聲，可達212 kHz，是所有蝙蝠中最高的。然而，蝙蝠科的壹些蝙蝠，如斑點蝙蝠的回聲定位頻率可低至11 kHz。使用極高或極低頻率叫聲的另壹個好處是，這些頻率的聲波很難被獵物——昆蟲察覺，這樣蝙蝠就能捕捉到更多的昆蟲。