PCR沒有獲得特異性條帶，這可能是由於以下因素。
首先，模板因素
1，使用部分降解的模板，對策是使用新鮮提取的模板；
2.使用了錯誤的模板。很多真核基因都有65，438+0或更多的內含子，而且內含子往往很長。此時不宜用基因組DNA作為模板，需要用全長的c DNA作為模板。
3.模板太少或太多。壹般來說，只要模板不是太少到極限，就可以擴增，但是太多的模板會形成拖尾帶，無法獲得特定的片段。對策是調整模板量；
第二，引發因素
1，引物設計或合成過程錯誤，重新檢查引物序列和方向性是否正確；
2.引物長度。如果引物太長，會增加pcr的特異性，但會降低pcr的效率。如果引物太短，特異性就會不足。因此，需要根據模板的復雜程度設計合適長度的引物，以保證pcr的特異性和效率。
3.引物的gc含量和結構。gc含量過高會對pcr產生不利影響。如果引物本身形成發夾等二級結構或者正負引物序列互補，pcr效率也會降低。對策是調整擴增的起始或終止位置來調整引物序列。
第三，PCR條件
1，壹種合適的DNA聚合酶，包括酶的活性、效率和適用對象。如果是長片段pcr，要使用相應的酶才能獲得更好的pcr結果；
2.是否設置了合適的延伸時間和溫度。比如酶效率1kb/min，目的片段2kb，延伸時間需要2-2.5min，如果只設置1min，pcr不能成功。再比如有的酶的延伸溫度是68℃，有的是72℃。如果溫度設置不正確，自然會失效。
3.退火溫度或時間，退火溫度過高會導致pcr效率下降，退火溫度過低會導致特異性下降，從而導致實驗失敗；探索合適的退火溫度，設定足夠的退火時間；
4.pcr的循環次數是否足夠，壹般設置在25個循環以上；
5.其他pcr因素，比如是否加入合適的Mg離子濃度和dNTP濃度，是否設置合適的預變性和變性溫度等等。
純手遊，歡迎采用，祝您愉快！