畫家在給她畫像時，為了讓她微笑，想了各種辦法:請樂師為她演奏音樂、唱歌，或者講笑話，讓歡快的氣氛有助於她展現笑容。畫中的蒙娜麗莎雖然呈現出淡淡的微笑，但妳可以從她的眉宇間看出內心的喜悅，笑容似乎剛剛從她的臉上掠過。微微翹起的嘴角，舒展的微笑肌，都能讓人感受到這個女人在繪畫瞬間的心情。但她安詳的神態，說明她的笑容很平靜，不會引起情緒波動，這是古代女性矜持之美的壹種表現。
《蒙娜麗莎》的藝術價值不能僅從生動的肖像來考慮，更重要的是達芬奇在這幅畫中體現了他先進的藝術思想，即他用科學精神觀察自然的態度。達芬奇在藝術上主張自然，但在神學思想中，人被視為惡的化身。達芬奇的《蒙娜麗莎》完全違背了宗教世界觀。這是對自然的頌歌。他的肖像肯定了生命的意義和它的美麗。因為蒙娜麗莎的微笑很迷人，所以許多藝術史學家稱之為“神秘的微笑”。