在基督教禁欲主義控制的時代，女性的行為受到諸多約束，未經允許不能表露自己的喜悅和痛苦，否則就是對上帝的“褻瀆”，在普通的上流社會女性中，也不允許隨意哭和笑。所以中世紀的肖像畫壹般都畫得呆板僵硬，臉上毫無表情。在人文主義的影響下，達芬奇開始盡力表達人們的感情。為了畫出蒙娜麗莎的真實形象，他還研究了解剖學和生理學，探索了隱藏在皮膚下的面部肌肉的微笑狀態，研究了人在輕松愉快時的心理變化和反應過程。因為這個原因，他廢寢忘食。有時候，微風吹動湖面上的漣漪這種現象也會吸引他的註意力，激發他去修改自己的畫面。其次，在構圖上，達芬奇改變了過去在肖像畫中使用側半身像或高至胸部的習慣，取而代之的是正面半身像。透視點略微上升，使構圖呈金字塔形。這樣蒙娜麗莎看起來更加端莊穩重。
還有蒙娜麗莎的壹雙手。這些細嫩的手畫得如此精準豐滿，完全符合解剖結構。它們顯示了她的個性，她的溫柔，她的身份和階級地位。從這雙手中，我們可以看到藝術家精湛的繪畫技巧和對自然敏銳的觀察力。《蒙娜麗莎》沒有華麗的服裝，深棕色的面紗，也沒有任何裝飾；服裝圖案的自然褶皺是精心繪制的。他用壹種混合的顏色來表現軟緞的質感。裸露的乳房無法展現這個女人健康、奢華、年輕的美。在處理背景時，達芬奇使用了“空中透視法”。相反，他身後的懸崖、小徑、石橋、樹木、流水都被推向了遙遠的深處，仿佛這壹切都籠罩在薄霧之中，以此來強化蒙娜麗莎的形象地位。他花了四年時間才畫出這麽小的壹幅畫像，這說明達芬奇不僅僅是想畫壹幅貴族小姐的畫像，而是在藝術上有所追求。
《蒙娜麗莎》的藝術價值不僅可以從栩栩如生的肖像被上考慮，更重要的是達芬奇在這幅畫中體現了他先進的藝術思想，即他用科學精神觀察自然的態度。達芬奇在藝術上倡導的是自然的和諧，但在神學思想上，人被視為邪惡的化身。列奧納多·達·芬奇的《娜麗莎》完全違背了宗教世界觀。這是對自然的頌歌。他的肖像肯定了生命的意義和它的美麗。