抗原elisa試劑盒在臨床實驗室,對試劑準備壹般不太註意,通常的做法是,在實驗時將試劑從冰箱中拿出來即用,而忽略了這種做法有可能影響後面溫育時間不夠的問題,其直接的後果是對壹些弱陽性標本的檢測出現假陰性。因此在ELISA測定中試劑的準備zui為關鍵的是,在實驗開始前,將試劑盒先從冰箱中拿出來,在室溫下放置20分鐘以上後,再進行測定,以使試劑盒在使用前與室溫平衡。這樣做的目的,主要是為了在後面的溫育反應步驟中,能使反應微孔內的溫度能較快地達到所要求的高度,以滿足測定要求。其次,目前的商品ELISA試劑盒中的洗板液均需在實驗室使用時對所提供的濃縮液稀釋配制,因此稀釋時所用的蒸餾水或去離子水應保證質量。此外,當試劑盒以OPD為底物時,則底物溶液應在反應顯色前臨時配制。 在現在的抗原elisa試劑盒中,血清樣本的加入幾乎是*的要使用微量加樣器加入樣本的步驟。使用微量加樣器加樣必須註意的關鍵點是:加樣不可太快,要避免加在孔壁上部,不可濺出和產生氣泡。加樣太快,無法保證微量加樣的準確性和均壹性。加在孔壁上部的非包被區,易導致非特異吸附。濺出會對鄰近孔產生汙染。出現氣泡則反應液界面有差異。試劑的加入在國產試劑盒中基本上均是從滴瓶中滴加,除了要註意滴加的角度外,滴加的速度也很重要,滴加太快,很容易出現重復滴加或加在兩孔之間的現象,這樣就會在孔內的非包被區出現非特異吸附,從而引起非特異顯色。所以,有時候壹份標本用相同的試劑盒這次測定為陽性,下次測定為陰性,往往就是上述加樣及試劑的錯誤所致。 溫育是ELISA測定中影響測定成敗zui為關鍵的壹個因素。ELISA作為壹種固相免疫測定,抗原抗體的結合反應在固相上進行,要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原*結合,必須在壹定的溫度條件下反應壹定的時間。溫育所需時間與溫度成反比,即溫度越高,則所需時間相對較短。抗原elisa試劑盒zui為常用的溫育溫度有37℃和室溫,其次是43℃和2～8℃。